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Infection by the larval stage of the cestode Echinococcus granulosus causes a disease known as cystic echinococcosis or hydatidosis, which is one of the most widespread zoonotic infections of veterinary and medical importance. Numerous studies have shown that E. granulosus exists as a complex of strains differing in a wide variety of criteria. Ten distinct genotypes (G1-G10) have been identified with potential impact on the pathology, epidemiology and the effect of the measures implemented for the control of hydatidosis. Our main objective was to carry out a preliminary analysis of the genotypes of E. granulosus circulating in the central inland region of Portugal. Parasite samples (hydatid cysts, n=27) were isolated from the liver and lung of sheep and cattle. The DNA extracted from protoscoleces isolated from the fertile cysts served a template for the PCR amplification of part of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit 1 (cox1), ATP synthase F0 subunit 6 (atp6) as well as the large (rrnL/16S) and small (rrnS/12S) ribosomal RNA genes. Similarity searches with homologous sequences in the databanks indicated very high similarity with references assigned to the G1, G3 and/or G1-G3 complex of Echinococcus strains. Phylogenetic analysis (Bayesian approach) supported these observations, and confirmed the assignment of all the analyzed sequences to the G1-G3 genetic cluster.

A hidatidose é uma zoonose, causada pelo helminta Echinococcus granulosus, presente de um modo geral, em todo o globo terrestre tendo na região mediterrânica uma elevada importância. Estão descritos, para esta espécie, 10 genótipos (G1 a G10) em saúde pública ligados a diferentes hospedeiros intermediários. Das técnicas de biologia molecular utilizadas para a genotipagem do E. granulosus, umas mostraram-se mais específicas e sensíveis que outras. Assim, neste estudo, pretende-se avaliar a PCR-RFLP na genotipagem de amostras de E. granulosus provenientes de Portugal. MATERIAL E MÉTODOS Foram obtidos 30 quistos hidáticos de ovinos e bovinos parasitados com E. granulosus e procedeu-se à extracção da areia hidática contida nos quistos. Foi extraído o DNA do parasita a partir da areia hidática e amplificada a região ITS-1 com três pares de “primers” diferentes (Eg16-PCR, Eg9-PCR e ITS-1-PCR). Foram aplicadas enzimas de restrição (Alu I, Cfo I, Msp I e Rsa I) a estes produtos de amplificação, os quais foram visualizados em electroforese em gel de agarose a 2,5%. Foi ainda amplificado o gene citocromo oxidase sub-unidade I (COI) e sequenciado. As sequências obtidas foram comparadas com algumas existentes no GenBank. RESULTADOS Foram obtidos produtos de amplificação para as reacções Eg16-PCR, Eg9-PCR e ITS-1-PCR. A eficiência de reacção foi de 100% para as primeiras duas PCR e cerca de 60% para a ITS-1-PCR. Foram obtidos diferentes padrões de corte, no produto amplificado, consoante a enzima usada. CONCLUSÕES Foram encontradas algumas divergências no padrão de corte com a mesma enzima, tendo sido essas amostras amplificadas para o gene COI e sequenciadas para determinar o genótipo em questão. Verificou-se, em todas as amostras que suscitaram dúvidas com a aplicação das enzimas de restrição, que se estava perante o genótipo G1. Assim, podemos concluir que para a genotipagem da espécie E. granulosus é necessário associar à técnica PCR-RFLP uma técnica mais específica, o que está de acordo com o mencionado por Villalobos et al. (2007) e Manterola et al. (2008)

Hydatidosis is a worldwide zoonosis caused by the larval stage of the tapeworm Echinococcus granulosus. The taxonomy and phylogeny of the genus Echinococcus has been a controversial issue for several years but with the usage of molecular tools to characterize the etiological agents these aspects had been clarified and a new classification has been proposed and is now widely accepted. The aim of this work is to determine the range of genetic variability within and between Portuguese E. granulosus isolates. The Portuguese isolates obtained from sheep and goats were characterized using mitochondrial COI gene sequencing. The sequences were aligned and compared with those present in the GenBank. Preliminary results showed that the Portuguese isolates were E. granulosus sensu stricto (G1-G3 cluster). In addition, phylogenetic analysis of E. granulosus isolates, using the mitochondrial NDI and Cob partial genes, was performed using neighbour-joining (Kimura 2-parameter correction) and Bayesian analyses. The findings showed some degree of variance within single isolates and a significant degree of variance between the cluster G1-G3, where our isolates were, and the other Echinococcus sp.. Despite the variance found among Portuguese isolates, they were all localized within one robust cluster.