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A hidatidose apresenta uma distribuição cosmopolita e encontra-se entre as zoonoses de maior importância a nível mundial. O parasita Echinococcus granulosus, responsável por esta doença, apresenta uma distribuição cosmopolita afectando diversas espécies de animais e, acidentalmente, o Homem. O objectivo do estudo é a obtenção do estado larvar do E. granulosus (protoescólices) para o estudo da fertilidade dos quistos em diferentes espécies animais em Portugal. MATERIAL E MÉTODOS: Para este estudo foi utilizado material biológico parasitado, obtido em matadouros públicos e privados da zona centro (Castelo Branco, Pedrógão e Guarda), recolhido entre Outubro de 2007 e Março de 2010. Procedeu-se à extracção do conteúdo dos quistos hidáticos (líquido e areia hidáticos). E através da observação ao microscópio óptico, observou-se a presença de protoescólices e/ou ganchos, bem como o seu estado de conservação e a presença de elementos estranhos. As amostras férteis foram conservadas a - 20ºC para posteriores trabalhos. RESULTADOS: Foram analisadas um total de 95 amostras de quistos hidáticos provenientes do fígado e pulmão de ovinos, bovinos e caprinos e estabelecida uma relação entre a fertilidade/infertilidade dos quistos e os órgãos parasitados. Relativamente à espécie hospedeira e faixa etária do animal parasitado, os resultados obtidos não foram estatisticamente significativos. DISCUSSÃO: Foi encontrada uma associação entre a fertilidade dos quistos hidáticos e órgão parasitado, apresentando uma relação semelhante às obtidas em estudos do mesmo género efectuados noutras zonas endémicas.

O céstode E. granulosus, agente causal da hidatidose/equinococose, está presente em diversas espécies de animais e, ocidentalmente, em humanos. Este apresenta uma grande variabilidade genética, com dez genótipos diferentes descritos (G1 – G10) onde alguns destes já são considerados novas espécies. Estes genótipos encontram-se distribuídos um pouco por todo o mundo, inclusive Portugal. O presente trabalho tem como objectivo comparar diferentes métodos de extracção de DNA para E. granulosus. MATERIAL E MÉTODOS: Procedeu-se à extracção de DNA de 20 amostras usando 3 kits comerciais, “High pure PCR template preparation kit”, “Easy spin kit”, “QIAamp DNA mini kit” e a extracção manual, com algumas modificações. Posteriormente foi efectuada a quantificação do DNA extraído, com obtenção do grau de pureza por densidade óptica (DO) a 230nm, 260nm e 280nm (GeneQuant, BIORAD) RESULTADOS: Foram obtidos diferentes resultados consoante método utilizado, variando a concentração de DNA entre 9,72±8,49ng/µL para “QIAamp DNA mini kit” (Qiagen) e 224,1±6,5ng/µL para o método de extracção manual (modificado). Em relação pureza do DNA, obtida a uma densidade óptica (DO) de 260/280nm, houve uma variação entre 0,21±0,12 para “Easy spin kit” (Citomed) e 1,82±0,34 para “High pure PCR template preparation kit” (Roche). DISCUSSÃO: O método de extracção manual modificado revelou-se o mais eficiente na extracção. Em relação à pureza do DNA obtido, os que melhores razões obtiveram foram o “High pure PCR template preparation kit” (Roche, Portugal) e o método de extracção manual (modificado), sendo que todos os outros registaram valores que indicam a presença de impurezas no DNA. Assim, poderemos inferir que o melhor kit para a extracção de DNA de E.granulosus é o método manual (modificado), visto ser aquele que maior quantidade de DNA extrai.

Infection by the larval stage of the cestode Echinococcus granulosus causes a disease known as cystic echinococcosis or hydatidosis, which is one of the most widespread zoonotic infections of veterinary and medical importance. Numerous studies have shown that E. granulosus exists as a complex of strains differing in a wide variety of criteria. Ten distinct genotypes (G1-G10) have been identified with potential impact on the pathology, epidemiology and the effect of the measures implemented for the control of hydatidosis. Our main objective was to carry out a preliminary analysis of the genotypes of E. granulosus circulating in the central inland region of Portugal. Parasite samples (hydatid cysts, n=27) were isolated from the liver and lung of sheep and cattle. The DNA extracted from protoscoleces isolated from the fertile cysts served a template for the PCR amplification of part of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit 1 (cox1), ATP synthase F0 subunit 6 (atp6) as well as the large (rrnL/16S) and small (rrnS/12S) ribosomal RNA genes. Similarity searches with homologous sequences in the databanks indicated very high similarity with references assigned to the G1, G3 and/or G1-G3 complex of Echinococcus strains. Phylogenetic analysis (Bayesian approach) supported these observations, and confirmed the assignment of all the analyzed sequences to the G1-G3 genetic cluster.

Hydatidosis is a worldwide zoonosis caused by the larval stage of the tapeworm Echinococcus granulosus. The taxonomy and phylogeny of the genus Echinococcus has been a controversial issue for several years but with the usage of molecular tools to characterize the etiological agents these aspects had been clarified and a new classification has been proposed and is now widely accepted. The aim of this work is to determine the range of genetic variability within and between Portuguese E. granulosus isolates. The Portuguese isolates obtained from sheep and goats were characterized using mitochondrial COI gene sequencing. The sequences were aligned and compared with those present in the GenBank. Preliminary results showed that the Portuguese isolates were E. granulosus sensu stricto (G1-G3 cluster). In addition, phylogenetic analysis of E. granulosus isolates, using the mitochondrial NDI and Cob partial genes, was performed using neighbour-joining (Kimura 2-parameter correction) and Bayesian analyses. The findings showed some degree of variance within single isolates and a significant degree of variance between the cluster G1-G3, where our isolates were, and the other Echinococcus sp.. Despite the variance found among Portuguese isolates, they were all localized within one robust cluster.

O céstode E. granulosus, agente causal da hidatidose/equinococose, está presente em diversas espécies de animais e, acidentalmente, em humanos. Este apresenta uma grande variabilidade genética, com dez genótipos diferentes descritos (G1 – G10), onde alguns destes já são considerados novas espécies. Estes genótipos encontram-se distribuídos um pouco por todo o mundo, inclusive Portugal. O presente trabalho teve como objectivo comparar diferentes métodos de extracção de DNA para E. granulosus, para optimização das técnicas de PCR utilizadas na sua caracterização molecular. Procedeu-se à extracção de DNA de 20 amostras usando 3 kits comerciais, “High pure PCR template preparation kit”, “Easy spin kit”, “QIAamp DNA mini kit” e a extracção manual de fenol-clorofórmio (Sambrook, 1989), com algumas modificações. Posteriormente, foi efectuada a quantificação do DNA extraído, do grau de pureza e da quantidade de sais por densidade óptica (DO) a 230nm, 260nm e 280nm (GeneQuant, BIORAD). Foi também tido em conta o tempo que demora cada extracção e o seu custo. Para de facto termos a certeza que se tratava de E.granulosus, efectuou-se a amplificação do gene mitocondrial ND1, recorrendo aos primers JB11, JB12 . Os resultados obtidos provam que o melhor método para a extracção de DNA de E.granulosus é o método manual fenol-clorofórmio (modificado) e que se tratava de E.granulosus, visto que ocorreu amplificação com os primers JB11 e JB12.