Qual o melhor método de extracção de DNA de echinococcus granulosus?
Type
conferenceObject
Identifier
ROQUE, Cláudio [et al.] (2011) - Qual o melhor método de extracção de DNA de echinococcus granulosus?. In Congresso Internacional de Análises Clínicas e de Saúde Pública da Escola Superior de Saúde Dr. Lopes Dias, 1, Castelo Branco, fevereiro.
Title
Qual o melhor método de extracção de DNA de echinococcus granulosus?
Subject
Echinococcus granulosus
Extração de DNA
PCR
Quantificação de DNA
Comparação de métodos de extracção de DNA
Extração de DNA
PCR
Quantificação de DNA
Comparação de métodos de extracção de DNA
Date
2014-04-03T15:44:21Z
2014-04-03T15:44:21Z
2011-02
2014-04-03T15:44:21Z
2011-02
Description
O céstode E. granulosus, agente causal da hidatidose/equinococose, está presente em diversas espécies de animais e, acidentalmente, em humanos. Este apresenta uma grande variabilidade genética, com dez genótipos diferentes descritos (G1 – G10), onde alguns destes já são considerados novas espécies. Estes genótipos encontram-se distribuídos um pouco por todo o mundo, inclusive Portugal.
O presente trabalho teve como objectivo comparar diferentes métodos de extracção de DNA para E. granulosus, para optimização das técnicas de PCR utilizadas na sua caracterização molecular.
Procedeu-se à extracção de DNA de 20 amostras usando 3 kits comerciais, “High pure PCR template preparation kit”, “Easy spin kit”, “QIAamp DNA mini kit” e a extracção manual de fenol-clorofórmio (Sambrook, 1989), com algumas modificações. Posteriormente, foi efectuada a quantificação do DNA extraído, do grau de pureza e da quantidade de sais por densidade óptica (DO) a 230nm, 260nm e 280nm (GeneQuant, BIORAD). Foi também tido em conta o tempo que demora cada extracção e o seu custo.
Para de facto termos a certeza que se tratava de E.granulosus, efectuou-se a amplificação do gene mitocondrial ND1, recorrendo aos primers JB11, JB12 .
Os resultados obtidos provam que o melhor método para a extracção de DNA de E.granulosus é o método manual fenol-clorofórmio (modificado) e que se tratava de E.granulosus, visto que ocorreu amplificação com os primers JB11 e JB12.
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