Caracterização molecular de Listeria monocytogenes ser. 4b por Amplified Fragment Length Polymorphism "AFLP"
Type
masterThesis
Publisher
Identifier
GOULÃO, Maria Manuela Martins Francisco (2010) - Caracterização molecular de Listeria monocytogenes ser. 4b por Amplified Fragment Length Polymorphism "AFLP". Angra do Heroísmo : Universidade dos Açores. 125 p. : quadros, gráficos. Dissertação de Mestrado.
Title
Caracterização molecular de Listeria monocytogenes ser. 4b por Amplified Fragment Length Polymorphism "AFLP"
Contributor
Ferreira, Maria Adélia da Silva Santos
Pintado, Cristina Maria Baptista dos Santos
Pintado, Cristina Maria Baptista dos Santos
Subject
Listeria monocytogenes
Tipagem por AFLP
Marcador geográfico
Queijo
Tipagem por AFLP
Marcador geográfico
Queijo
Date
2011-03-24T17:08:00Z
2011-03-24T17:08:00Z
2010
2011-03-24T17:08:00Z
2010
Description
Dissertação do Mestrado em Engenharia Zootécnica, ministrado em colaboração pela Universidade dos Açores e pela Escola Superior Agrária do Instituto Politécnico de Castelo Branco.
O serotipo maioritariamente associado às estirpes de Listeria monocytogenes isoladas de queijos Portugueses pertence ao serotipo 4b, o qual está referido na literatura como o responsável pelo maior número de casos de listeriose humana. Tendo em conta a importância de que se revestem estas estirpes, a sua caracterização usando métodos mais discriminatórios que a serotipagem é de crucial importância. Assim, o presente estudo teve por finalidade a caracterização molecular de estirpes de L. monocytogenes ser. 4b, isoladas de queijos de diferentes zonas do país, e uma primeira avaliação da distribuição geográfica dos tipos moleculares encontrados. Foi usado o método Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) com base no protocolo que se encontra em funcionamento no Health Protection Agency Department of Gastrointestinal Infections / Centre for Infections, em Londres. Para a análise da similaridade entre estirpes recorreu-se ao programa Bionumerics. O poder discriminatório do método AFLP foi calculado através do índice de diversidade de Simpson. Das 47 estirpes de L. monocytogenes ser. 4b tipadas neste trabalho resultaram 6 perfis diferentes com um número de bandas compreendido entre 5 a 7 no intervalo entre 500 bp e 1500 bp. Todos os perfis AFLP apresentaram uma banda comum de aproximadamente 850 bp. O poder discriminatório do método AFLP foi avaliado em 0,70. Pela análise do dendrograma observou-se a existência de 6 clusters para uma percentagem de similaridade de 98%, os quais foram agrupados de acordo com o tipo AFLP previamente atribuído. A relação de similaridade mais afastada encontrada entre os 47 isolados foi de 67%. Considerando a totalidade dos isolados provenientes da região da Serra da Estrela, foi possível identificar 5 tipos AFLP, quatro dos quais identificados apenas naquela zona e um quinto tipo AFLP com uma distribuição geográfica alargada (Serra da Estrela, Serpa e São Jorge), o que contraria a sua utilização como marcador geográfico. Comparando estes 47 perfis com os obtidos anteriormente pelo mesmo método usando isolados provenientes das zonas produtoras de queijo de Castelo Branco e Tolosa (n=61), conclui-se que os tipos AFLP obtidos são diferentes, não havendo tipos AFLP comuns entre as zonas de Tolosa, Castelo Branco e Serra da Estrela, indicando uma associação entre um determinado tipo AFLP de L. monocytogenes ser. 4b e cada uma destas regiões.
O serotipo maioritariamente associado às estirpes de Listeria monocytogenes isoladas de queijos Portugueses pertence ao serotipo 4b, o qual está referido na literatura como o responsável pelo maior número de casos de listeriose humana. Tendo em conta a importância de que se revestem estas estirpes, a sua caracterização usando métodos mais discriminatórios que a serotipagem é de crucial importância. Assim, o presente estudo teve por finalidade a caracterização molecular de estirpes de L. monocytogenes ser. 4b, isoladas de queijos de diferentes zonas do país, e uma primeira avaliação da distribuição geográfica dos tipos moleculares encontrados. Foi usado o método Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP) com base no protocolo que se encontra em funcionamento no Health Protection Agency Department of Gastrointestinal Infections / Centre for Infections, em Londres. Para a análise da similaridade entre estirpes recorreu-se ao programa Bionumerics. O poder discriminatório do método AFLP foi calculado através do índice de diversidade de Simpson. Das 47 estirpes de L. monocytogenes ser. 4b tipadas neste trabalho resultaram 6 perfis diferentes com um número de bandas compreendido entre 5 a 7 no intervalo entre 500 bp e 1500 bp. Todos os perfis AFLP apresentaram uma banda comum de aproximadamente 850 bp. O poder discriminatório do método AFLP foi avaliado em 0,70. Pela análise do dendrograma observou-se a existência de 6 clusters para uma percentagem de similaridade de 98%, os quais foram agrupados de acordo com o tipo AFLP previamente atribuído. A relação de similaridade mais afastada encontrada entre os 47 isolados foi de 67%. Considerando a totalidade dos isolados provenientes da região da Serra da Estrela, foi possível identificar 5 tipos AFLP, quatro dos quais identificados apenas naquela zona e um quinto tipo AFLP com uma distribuição geográfica alargada (Serra da Estrela, Serpa e São Jorge), o que contraria a sua utilização como marcador geográfico. Comparando estes 47 perfis com os obtidos anteriormente pelo mesmo método usando isolados provenientes das zonas produtoras de queijo de Castelo Branco e Tolosa (n=61), conclui-se que os tipos AFLP obtidos são diferentes, não havendo tipos AFLP comuns entre as zonas de Tolosa, Castelo Branco e Serra da Estrela, indicando uma associação entre um determinado tipo AFLP de L. monocytogenes ser. 4b e cada uma destas regiões.
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